檢測(cè)原理:
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ELISA法??筆rotein A 抗體已包被于酶標(biāo)板上。加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品,樣本、標(biāo)準(zhǔn)品中的Protein A與包被于酶標(biāo)板上的抗Protein A結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,通過(guò)洗板,游離的成分被洗去;加入HRP標(biāo)記的抗Protein A 抗體,標(biāo)記了HRP的抗Protein A 抗體會(huì)與結(jié)合于酶標(biāo)板上的標(biāo)準(zhǔn)品或樣本中Protein A結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,通過(guò)洗板,游離的成分被洗去。加入顯色底物(顯色劑),若反應(yīng)孔中有Protein A,辣根過(guò)氧化物酶會(huì)使無(wú)色的顯色劑變藍(lán),加終止液變黃。在450nm 處測(cè)OD值,Protein A 濃度與OD450值之間呈正相關(guān),可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求出標(biāo)本中Protein A 濃度。
試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材:
1. 酶標(biāo)儀(450nm檢測(cè)波長(zhǎng)濾光片,570nm或630nm校正波長(zhǎng)濾光片)
2. 高精度加液器及一次性吸頭、0.5-10uL, 2-20uL,20-200uL,200-1000uL。
3. 微孔板振蕩器, 雙蒸水或去離子水。