產(chǎn)品概述

與原核細(xì)胞、酵母細(xì)胞以及昆蟲細(xì)胞相比,中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)作為宿主細(xì)胞表達(dá)的外源蛋白最接近其天然構(gòu)象,因而CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)是生物工程制藥最為理想的表達(dá)系統(tǒng)。在CHO細(xì)胞中表達(dá)治療性蛋白對(duì)于商業(yè)化的藥物表達(dá)來(lái)說(shuō)很經(jīng)濟(jì)方便，但是這類產(chǎn)品的生產(chǎn)以及純化過(guò)程有可能會(huì)帶來(lái)CHO宿主細(xì)胞蛋白殘留的污染，這些殘留的蛋白污染會(huì)降低藥物治療效果，造成副作用或者免疫反應(yīng)，所以要將CHO宿主細(xì)胞蛋白殘留降低到最低濃度。傳統(tǒng)用來(lái)檢測(cè)CHO宿主細(xì)胞蛋白殘留的方法有Western Blot和ELISA， Western blot的實(shí)驗(yàn)過(guò)程復(fù)雜，靈敏度低，可變因素較多，ELISA的方法要更加簡(jiǎn)單，結(jié)果也更可靠，靈敏度比Western Blot高100倍。CHO Host Cell Proteins 3rd Generation ELISA 可以輔助蛋白純化、過(guò)程控制、質(zhì)量控制等流程中CHO宿主細(xì)胞蛋白殘留的控制，優(yōu)化工藝流程，確保蛋白生產(chǎn)的安全進(jìn)行。

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ELISA法。抗CHO HCP抗體包被于酶標(biāo)板上，同時(shí)加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品和生物素標(biāo)記的抗CHO HCP抗體，標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品中的CHO HCP會(huì)與加入于孔中的生物素標(biāo)記的抗CHO HCP抗體及包被于酶標(biāo)板上的抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，通過(guò)洗板，游離的成分被洗去。加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素，親合素與生物素特異性結(jié)合，游離的成分被洗去。加入顯色底物（顯色劑），若反應(yīng)孔中有CHO HCP，辣根過(guò)氧化物酶會(huì)使無(wú)色的顯色劑變藍(lán)，加終止液變黃。在450nm處測(cè)OD值，CHO HCP濃度與OD450值之間呈正相關(guān)，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CHO HCP濃度。

試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材:
1. 酶標(biāo)儀(450nm檢測(cè)波長(zhǎng)濾光片，570nm或630nm校正波長(zhǎng)濾光片)
2. 高精度加液器及一次性吸頭：0.5-10ul, 2-20ul,20-200ul,200-1000ul
3. 微孔板振蕩器, 雙蒸水或去離子水，坐標(biāo)紙。